· 加樣反應(yīng)：取出所需量的反應(yīng)板條，每孔加樣本稀釋液（5號(hào)液）2滴，再分別加入待檢的血清樣本10ul，混勻。同時(shí)設(shè)陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔，陰性、陽(yáng)性對(duì)照與待檢樣本同步處理，空白對(duì)照孔僅加入樣本稀釋液（5號(hào)液）2滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液（2號(hào)液）1滴，立即用蒸餾水注滿，靜置30秒后甩去，再直接用蒸餾水洗滌四次，甩去，拍干。

· 加酶反應(yīng)：除空白對(duì)照孔外其余每孔加酶結(jié)合物（1號(hào)液）2滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

· 顯色反應(yīng)：加底物（3號(hào)液）和顯色劑（4號(hào)液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。加終止液（6號(hào)液）1滴，混勻，終止反應(yīng)（加終止液后藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并觀察結(jié)果。

結(jié)果判斷

· 肉眼觀察：陰性對(duì)照接近無(wú)色，陽(yáng)性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。待檢孔接近無(wú)色表示該標(biāo)本為陰性，待檢孔呈明顯黃色表示該標(biāo)本為陽(yáng)性。

· 儀器判斷：以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（620nm作參比波長(zhǎng)）讀取O.D值，待檢孔O.D值大于陰性對(duì)照2.1倍者為陽(yáng)性。當(dāng)陰性對(duì)照O.D值低于0.05時(shí)按0.05計(jì)算。

注意事項(xiàng)

· 試劑盒在2-8℃下保存，每次取出時(shí)先平衡至室溫后使用。滴瓶每次用后一定要將蓋擰緊，各瓶蓋之間切不可混用。各試劑盒之間不可混用。

· 洗滌時(shí)將蒸餾水加滿孔內(nèi)，每次停放三十秒鐘，甩去孔內(nèi)液體。禁用自來(lái)水等其它水源。

· 為提高試驗(yàn)的可比性，建議使用儀器判讀結(jié)果。

· 如有條件，使用水浴箱孵育。

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