【預期用途】

禽流感（ Avian influenza ，AI）是禽流行性感冒的簡稱，是由正粘病毒科、流感病毒屬 A 型流感病毒引起的禽類（家禽或野禽，亦有部分哺乳動物）的一種傳染病。根據(jù)禽流感致病力的不同可分為非致病力禽流感（NPAI）、低致病力禽流感（LPAI）和高致病力禽

【適用儀器】A BI 7500、ABI 7300、LightCycler480 等熒光定量 PCR 儀。

【樣本要求】

1. 適用樣本類型：咽喉拭子、泄殖腔拭子、肌肉或臟器樣本等。

2. 樣品采集與前處理（注意無菌操作）

2.1 活禽樣品——取咽喉拭子和泄殖腔拭子，或新鮮糞便拭子，具體采集方法如下：

·咽喉拭子，采取時要將拭子深入喉頭及上腭裂來回刮3～5次，取咽喉分泌液；

·取泄殖腔拭子時，將拭子深入泄殖腔轉(zhuǎn)一圈沾取糞便；對于易造成損傷的小珍禽，直接用拭子沾取適量新鮮糞便；

·將咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有1.0ml PBS的Eppendoff管中，編號備用。

2.2 內(nèi)臟或肌肉樣品——用無菌鑷剪夾取待檢樣品2.0g于研缽中充分研磨，再加10ml PBS混勻，或置于組織勻漿器中，加入10 ml PBS

勻漿，然后將組織懸液轉(zhuǎn)入無菌Eppendoff管中3,000 rpm離心10 min，取上清液轉(zhuǎn)入Eppendoff管中，編號備用。

同時供應(yīng)以下試劑（48T/盒）：

3. 保存與運送

請遵循目前的流感標本采集方案以及標準的流感標本儲存、包裝和運送標準和相應(yīng)的航空運輸協(xié)會的規(guī)定。

【檢驗方法】

1.樣本處理和核酸提取（樣本處理區(qū)）

建議取 200μl 液態(tài)樣本進行核酸提??；組織樣本可以研磨液進行提取操作?？刹捎弥猩酱髮W達安基因股份有限公司生產(chǎn)的核酸

提取試劑盒，請按照試劑盒說明書進行操作；也可選擇其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品。

本試劑盒中的陰性質(zhì)控品參與提取，用于對環(huán)境進行監(jiān)控；AIV H5 陽性質(zhì)控品不參與提取，用于 PCR 檢測試劑的質(zhì)控。

2.PCR 試劑準備（試劑準備區(qū)）

從試劑盒中取出 AIV H5 PCR 反應(yīng)液 A、AIV H5 PCR 反應(yīng)液 B，室溫融化后振蕩混勻，8,000rpm 離心數(shù)秒后使用。

2.1 H5 反應(yīng)體系配制

取適量 PCR 反應(yīng)管，每管加入 AIV H5 PCR 反應(yīng)液 A 17μl、AIV H5 PCR 反應(yīng)液 B 3μl（也可根據(jù) PCR 反應(yīng)用量，計算各組分所需總

量，混勻后分裝 20μl 于單個 PCR反應(yīng)管中）；

3.加樣（樣本制備區(qū)）

于上述PCR反應(yīng)管中分別加入處理后的陰性質(zhì)控品、待測標本核酸、AIV H5 陽性質(zhì)控品各5μl，蓋緊管蓋，8,000rpm 離心數(shù)秒后轉(zhuǎn)

移至擴增檢測區(qū)。

3.2 ABI Prism 7500 儀器設(shè)置（ABI 7500 儀器操作為例，ABI 7300 儀器參照此操作及儀器操作手冊）

3.2.1 打開“Setup”窗口，按樣本對應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控（NTC）、陽性質(zhì)控以及未知樣本（Unknown），并在“Sample Name”一欄中設(shè)

Start 值可以在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，調(diào)整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analysis 自動獲得分析結(jié)果，在 Report

界面察看結(jié)果。

4.質(zhì)量控制

陰性質(zhì)控品：擴增曲線無對數(shù)增長期；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯對數(shù)增長期，且 Ct 值≤32；

以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行。

5.結(jié)果判定

1. 如果檢測樣品的擴增曲線無對數(shù)增長期或 Ct 值＞38，可判樣品為禽流感 H5 亞型陰性；

2. 如果檢測樣品 Ct 值≤38，且曲線有明顯的對數(shù)增長期，可判樣品為禽流感 H5 亞型陽性。

【檢測方法的局限性】

樣本檢測結(jié)果和樣本收集、處理、運送及保存質(zhì)量有關(guān)，其中任何失誤都將會導致假陰性結(jié)果。如果樣本處理時沒有控制好交叉

污染，可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標】

根據(jù)產(chǎn)品分析性能評估結(jié)果，本試劑盒的靈敏度為 1.0×10

3 copies/ml。與感染部位相同或感染癥狀相似的其他病原體（副流感病

毒、新城疫病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等）無交叉反應(yīng)。

【注意事項】

1.本產(chǎn)品僅用于體外診斷；

2.實驗室管理應(yīng)嚴格按照 PCR 基因擴增實驗室的管理規(guī)范，實驗人員必須進行專業(yè)培訓，實驗過程嚴格分區(qū)進行（試劑準備區(qū)、標

本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)），所用消耗品應(yīng)滅菌后一次性使用，實驗操作的每個階段使用的儀器和設(shè)備，各區(qū)各階段用品不

能交叉使用；

3.為試劑和標本準備階段提供生物安全柜，實驗過程中穿工作服，帶一次性手套，使用自卸管移液器；

4.試劑使用前要*解凍，8,000rpm 離心數(shù)秒后使用；

5.標本制備區(qū)所用過的吸頭請打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄；

6.實驗完畢用 10%次氯酸或 75%酒精處理工作臺和移液器,然后用紫外線燈照射 20－30 分鐘；

7.本試劑盒內(nèi)陽性質(zhì)控品應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通

用準則》和《醫(yī)療廢物管理條例》

具體說明請根據(jù)以下信息

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