禽呼腸孤抗體檢測試劑盒使用說明書

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【用途】 
用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體

【試驗原理】
禽呼腸孤病毒被認為與病毒性關節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質疏松有關，從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發(fā)疾病的的性質、癥狀和嚴重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監(jiān)測。
將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結合并形成REO抗原-抗體復合物，然后洗掉未結合的物質，加入堿性磷酸酶標記的抗雞的IgG（結合物）至微孔板中，結合物將與REO抗原-抗體復合物結合，孵育后洗掉未結合的結合物，加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應形成黃色的物質。zui后，終止反應，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標儀（405-410nm）測定。

【一個微孔板所需的試劑的量】

Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU）              陽性對照值設為100 EU

【結果判定及EU單位說明】
REO ELISA 值                        說明
小于10EUs                            REO抗體為陰性
10-25 EUs                            REO抗體為弱陽性，應被認為經過免疫或暴露于REO，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
25-75 EUs                             REO抗體適度陽性
＞75 EUs                              REO抗體強陽性

【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對照、陰性對照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對照、陰性對照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調到100μl，反復吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對照、陽性對照分別加入微孔中，每種做兩個平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復洗滌2次，在洗滌過程中防止酶標板變干。
8. 每孔立即加入100μl結合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復步驟7進行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標儀雙波讀數（405nm或410nm作為主要波長，630nm或650nm為參考波長），計算結果。

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